[討論]簡介一般快篩原理與ELISA

RT-qPCR為目前認可的唯一檢測方法，大概的原理猴子那篇文也介紹了，雖然靈敏度 和偵測極限都很優秀，但畢竟檢測負荷量有限，未來疫情擴大發展為社區感染 不可能第一時間都做，需要發展快速檢測及快篩 首先先來介紹一下 甚麼是抗體 (Antibody, Ab)和抗原 (Antigen, Ag): 當身體有非我族類的外物進到身體 (病原體或花粉塵蟎之類的過敏原等..) 這些東西被免疫系統認為是種抗原 並會產生對抗這種抗原的專一性抗體,可以結合上抗原的表位 (epitope)把它給清除掉 https://imgur.com/T4FzHbi (https://tinyurl.com/sjr9jjl) 一個抗原可能有很多種表位，所以會產生數種結合不同表位的抗體 第一次碰到的抗原，身體得要花4~7天產生初步的抗體 這個抗體是 IgM,過一段時間後(數個禮拜)， IgM逐漸減少，經類型轉換及親和力成熟轉為 分泌 IgG/IgE/IgA IgG是人體最主要的抗體、 IgE和過敏有關、 IgA可以附著於黏膜(呼吸道,腸道) 中和病原體、毒素等物質。 https://imgur.com/E9gyzJs (https://tinyurl.com/seh7adl) 當下一次遇到同樣的抗原,可以快速產生 IgG清除感染。 甚麼是ELISA? ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay)最簡單的描述就是 利用抗原/抗體之間的專一性結合反應來得知結果，有分為幾種形式 這次先介紹常用的 https://imgur.com/2f0Feub (https://tinyurl.com/syg24ed) a. Sandwitch ELISA 主要用來檢測抗原,以 HIV為例: (1) 先在檢測用的孔盤上固定抗 HIV的抗體 (Anti-HIV Ab,上圖紫色) (2) 加入檢體 (血液)，如果裡面有HIV (藍色圓形),則會和 Anti-HIV Ab結合 (3) 洗掉沒結合的，加入另一種 Anti-HIV Ab (從其他動物產生的,這裡以鼠為例,黃色) (4) 洗掉沒結合的，加入抗鼠抗體(抗黃色的,藍色)的抗體 (從羊產生的)，不過這個 抗體上加了一種酵素 (HRP, 綠色) (5) 洗掉沒結合的，加入酵素的受質 (Substrate如 TMB, ABTS),受質會被酵素切割產生產物 之後檢測產物就知道結果了 b. Indirect ELISA 主要用來檢測抗體,還是以 HIV為例: (1) 孔盤上固定 HIV的抗原(上圖藍色)，並加入檢體(血液) (2) 如果檢體裡有 抗HIV的抗體 (黃色)，則會結合上 HIV的抗原 (3) 洗去未結合的，加入抗人抗體的抗體 (二級抗體,從其他動物產生,藍色)，這抗體有 酵素 (HRP) (4) 同a. 跟PCR比較: 優點: 檢測量更高(高通量)、比較便宜 缺點: 靈敏度較低，在疾病早期病毒量不高或尚未產生抗體時易偽陰性(測不到) 以 HIV來說，目前的第四代 EIA (ELISA, CMIA)為 Ag/Ab combo 同時檢測 HIV的抗原 (p24)以及抗體 (Anit-TMP Ab)，陽性再以 WB做確認 空窗期(易檢測不到)縮短為 2~3周，但如果使用 RT-qPCR，則可縮短至 7~10天 大概介紹了 ELISA，再來介紹快篩: 快篩常看到的形式是快篩片/棒,除了可以檢測疾病外,驗孕棒也是相似的原理 快篩片所使用的技術叫 Lateral flow assay，是基於免疫色層分析法 (Immunochromatographic test, ICT) 原理其實同樣是抗原/抗體專一性結合反應 常用來檢測的疾病像是流感 (Nucleoprotein)、登革熱 (NS1)、HIV (Anti-HIV Ab) 這邊以登革快篩片做舉例，它可以檢測檢體中登革病毒產生的抗原 NS1 上面分為幾個部分: a. Conjugate pad: Anti-NS1 Ab(鼠)-膠體金 (Colloidal gold)複合物 b. Test line: 另一種 Anti-NS1 Ab(鼠) c. Control line: Anti-mouse IgG Ab (羊) (1) 加入檢體(血液)，帶動 Anti-NS1 Ab前進，如果檢體有 NS1則會和它結合 (2) 移動至 Test line時，會和固定於此的另一種 Anti-NS1 Ab結合，形成 Ab-Ag-Ab 複合物， Test line出現調帶。 (3) 部分的 Anti-NS1 Ab繼續前進至 Control line，和固定於此的羊抗鼠 IgG的抗體 結合 (Anti-mouse IgG Ab)， Control line出現調帶，不論有無NS1，以確保套組正確。 https://imgur.com/GvCH0rF https://tinyurl.com/rlyus6t 快篩的優點: 超快(30分鐘內)、簡單 缺點: 靈敏度是真的可憐，流感快篩大概只有 50~70%，也就是說有 30~50%機率 測不到 (偽陰性)，同樣的早期病毒量不高或是抗體尚未生成測不到 但畢竟是能快速、簡單且可以大量分配檢測的方法，發展還是必要的 另外我這邊想說一下對於 SARS-Cov-2檢測數次為陰性，之後才陽性以及異常潛伏期的看法 目前來看潛伏期多為 2~14天，通常不會超過6天，卻出現疑似超長潛伏期的患者 1. 操作/試劑問題: SARS-Cov-2是 RNA病毒，使用的 RT-qPCR會先進行 RT轉為 DNA 再進行 DNA擴增，但有做過的人都知道: RNA很怕 RNA水解酶(RNase)，而且 RNase everywhere，空氣中、人和物體表面隨處都有，只要操作清潔不注意不確實 你的樣品就88了，另外檢測套組 (試劑盒)也可能有問題，像是版上的這篇 https://www.ptt.cc/bbs/nCoV2019/M.1581566306.A.F11.html 2. 之後再感染: 其實我覺得這個可能性最高，一般感冒或流感發燒咳嗽很正常 你這時候去驗當然驗不出來，但在這段期間可能被傳染 SARS-Cov-2，過了一長段時間 再檢測測到了，就可以發一篇文說: 可怕狡猾的病毒!潛伏期長達90天，然後就受驚了 3. 這病毒真的很神秘: 這我就不曉得了，那得看後續的研究 總之大概就是這樣，在面臨未來可能無法避免的社區感染，病患多到負壓病房住不下 的危險情況下，希望檢測技術和抗病毒藥物發展能早日控制住疫情。 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 61.230.119.37 (臺灣) ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/nCoV2019/M.1582017190.A.9BA.html