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[求救] 放大現有cDNA library

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最新2023-09-06 22:11:00
留言24則留言,6人參與討論
推噓3 ( 3021 )
最近要做一個實驗,需要購買comercial human cDNA library進行gene放大的實驗, 因為需要放大的gene非常多(有快要200組的primer要做), 一般買來的cDNA library大多只能做20 ~ 40 reaction,還要考慮失敗的問題, 由於cDNA library真的很貴,要多買幾管的話會非常花錢, 請問是否有可能用PCR的方法先將library放大,且仍保留library的diversity呢? 雖然知道從RNA反轉成cDNA的方法,但是不知道是否可以用在放大cDNA上... 非常感謝! -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 61.216.91.60 (臺灣) ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1693799453.A.718.html

24 則留言

blence, 1F
這library不是在vector上嗎?

jonsauwi, 2F
看DATASHEET是RT轉完的產物,不是在Vector裡的樣子...y

Ice9, 3F
小心實驗結果會失真。你們論文上也不能省掉這一步沒寫。

Ice9, 4F
是否能考慮適量稀釋原液?

blence, 5F
cDNA pool如果不是接在vector就稱做library有點怪,純粹RT

blence, 6F
就是cDNA,如同一般不會說拿cDNA library做qPCR看表現量

blence, 7F
不知道你的目的,如果是要拿到full-length clone,稀釋跟自

blence, 8F
行放大都不是好辦法

jonsauwi, 9F
原來如此...我們現在可能會再去找看看是否有直接接在

jonsauwi, 10F
vector裡可自行放大的library...

jonsauwi, 11F
我們是要從這library裡拿到full-length clone的

blence, 12F
就這個狀況我會multi-plex,或真的花錢買大量的折扣

jonsauwi, 13F
感謝樓上,我再研究看看並跟老闆討論是要用那種方案...

lemonteas, 14F
好奇為什麼不從RNA開始?

xxtomnyxx, 15F
RNA樣本哪來啊XDDD 人類的耶XD

lemonteas, 16F
抽血.醫院檢體?

Ianthegood, 17F
如果是RT產物 5' ssDNA linker ligation -> polyT PCR

Ianthegood, 18F
?

blence, 19F
我猜原po的應該只是tissue-specific cDNAs,就像下面這種,

blence, 20F
ScienCell Research Laboratories #1104

blence, 21F
Human Brain Vascular Smooth Muscle Cell cDNA

blence, 22F
才會覺得只有20~40 reaction可用

blence, 23F
library應該像Human Embryonic Stem Cell Primary cDNA

blence, 24F
Library, XpressBio #12260-P這種vector形式的,可用上千次

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